2016年11月28日，浦江分子诊断大讲堂第二讲液体活检专题讲座在上海交通大学附属胸科医院开讲，本次大讲堂由复旦大学附属中山医院检验科副主任郭玮教授主持，此次嘉宾有上海交通大学医学院检验系童建华教授、第二军医大学附属长海医院检验科主任刘善荣教授、上海交通大学系统生物医学研究院施奇惠教授、上海交通大学附属胸科医院检验科主任娄加陶教授。
首先由童建华教授介绍了浦江分子诊断大讲堂的目标--为分子诊断从业人员搭建一个新方法新技术的普及平台，希望通过本次液体活检专题讲座引发大家的积极讨论。主持人郭玮教授指出液体活检不能仅停留于技术层面，迫切需要进行临床转化。
第一位讲者刘善荣教授，讲课题目是《循环肿瘤细胞分析与培养》。首先介绍了循环肿瘤细胞研究的临床意义:实时监测肿瘤的发展进程及治疗效果；结合CTC基因突变位点，进行药敏实验，可发现新的肿瘤治疗靶点。在此基础上重点介绍了循环肿瘤细胞的分析与培养。外周血中CTC存在不同类型，包括上皮细胞表型、间质细胞表型和上皮细胞与间质细胞混合表型。
表达的标志分子也差别较大，加大了后续的分离研究的难度。随后主要介绍目前CTC分离的主要技术，及目前CTC分离技术中存在的局限性。最后介绍在CTC分析与培养方面所做的工作。并对未来CTC的研究方向及趋势做简单的展望。
第二位讲者施奇惠教授，讲课题目是《循环肿瘤细胞的鉴定与单细胞测序》。人外周血中的循环肿瘤细胞数目极少，但反映了体内肿瘤的存在与转移的可能，并携带了肿瘤病灶细胞的全部分子信息。CTC检测的核心在于如何准确的鉴定所富集分离到的的确是肿瘤细胞以及进一步确定与转移、治疗相关的CTC，因此需要对疑似CTC进行单细胞测序。
最后一位讲者娄加陶教授，讲课题目是《CTC生物活性及检测》。介绍了CTC的多种富集方法、单细胞纯化策略及验证方法。随后详细讲解了CTC临床应用。2016年一项1210个病例的研究（Lou，2016）表明单项CTC检测的辅助诊断价值优于多个一般肿瘤标志物联合，与一般肿瘤标志物相比，CTC诊断肺癌的敏感性提高3倍，I期肺癌提高10倍。CTC联合CT可以大大提高小结节诊断的特异性，CTC辅助CT可以将小结节的判别假阳性率降低到<10%（Lou，in submission）。而且CTC分型亚群可以指示一线化疗“培美曲塞”的最佳收益人群。
浦江分子诊断大讲堂第二讲液体活检专题讲座圆满结束，听众提了很多工作中遇到的问题，摘选部分如下。
听众提问
听众：CTC的培养是外周血进行富集以后培养，还是干细胞分选以后表达ICAN1的细胞群进行培养？关于ICAN1和CD45阴性的干细胞群接下来的工作中关于临床应用中用于肿瘤早期筛查和诊断过程中，如果都有该细胞群的存在还应该涉及到这群细胞的cut off值或者跟肿瘤病人个体状态有关，是不是就可以认为转移，需要临床干预，如何设定cut off值？
回答：两种方法：一是流式分选，一是直接富集；两种方法都是有各自的技巧和特点。直接富集的方法对细胞的破碎裂解的掌握非常重要，比如破红的过程中，不光是红细胞又破环，他对白细胞和肿瘤细胞也有不同程度的破坏，如果这个过程的时间掌握不好的话，可能最后培养的时候什么也培养不出来；流式分选：对于细胞裂解掌握不好的可以选择用流式做分选。而我个人比较偏向流式分选。关于Cut off值：如果拿出ICAN1进行染色，来进一步确定它就是肝癌细胞的话，则基本不考虑cut off值，而是使用测序来做敏感药物的筛选和肿瘤早期转移的防治。
听众：该次研究的临床数据中的阳性率有多少？肝癌细胞是非常特别抑制的细胞，怎么看待该肝癌干细胞与其它的肝癌干细胞。
回答：做了60例样本中都是有该细胞的。而ICAN1不是唯一的肝癌干细胞，因为不同的肿瘤，不同的患者及不同的发病期会有不同的细胞起主导作用。在这里提出的概念为：一、以病理为导向的精准用药；二是以问题为导向的转化研究。
